Gal d 4 ELISA Kit - Single plate/卵清蛋白过敏原（Gal d 4）酶联免疫检测试剂盒
概述
一、试剂盒组成
本试剂盒由多种关键组分构成，具体如下：
| 组成 | 详情 |
|---|---|
| Gal d 4 抗体预包被板 | 1 块 96 孔板 |
| Gal d 4 标准抗原（浓度 2000ng/ml） | 1 支（45uL） |
| 生物素偶联 Gal d 4 抗体 | 1 支（11uL） |
| 链霉抗生物素化过氧化物酶 | 1 支（11uL） |
| 洗涤缓冲液 (10X) | 1 支（6mL） |
| 稀释缓冲液 (10X) | 1 支（4mL） |
| 底物 | 1 支（11mL） |
| 终止液 | 1 支（6mL） |
| 封板膜 | 3 张 |
二、保存方式及稳定性
- 按条件保存的试剂盒保质期为 18 个月（见盒外失效日期），所有组分均可常温运输。
- 收到试剂盒后，请于 2-8℃作长期保存。
- 稀释后的缓冲液可以储存在 4℃一周。
- 本试剂盒仅限科学研究使用。
三、用户自备仪器及耗材
- 18.2MΩ 去离子水或者超纯水
- 刻度量筒，离心管
- 清洁缓冲液和试剂制备容器
- 涡旋混合器
- 移液器，枪头
- 能读取 450nm 处的吸光度
四、实验步骤
在试验开始前请将试剂盒置于室温（20-25℃）。
1.使用 18.2MΩ 去离子水或者超纯水在干净的容器中将 10X 的浓缩液制备成 1X 的洗涤缓冲液和样本稀释液
对于一块板：
洗涤缓冲液：将 6mL 浓缩液加入 54mL 水中（总体积 60mL）
稀释缓冲液：将 4mL 浓缩液加入 36mL 水中（总体积 40mL）
•依据试验样本量进行稀释，高浓度样品在加入平板之前需要预稀释。
2.从铝箔袋中取出检测板。
3.向 A1-H1 和 A2-H2 孔中加入 100μL 稀释缓冲液。A1 和 A2 孔中额外添加 80μL 稀释缓冲液。
4.标准品配制加样：轻轻涡旋 Gal d 4 标准品，向孔 A1 和A2 中加入 20μL。通过上下移液混匀，然后将 100μL 转移到孔B1 和 B2，继续混匀并稀释到 F1 和F2，从孔 F1 和 F2 中取出并丢弃 100µL（剩余 100µL）。孔 G1、G2 和 H1、H2 中的稀释缓冲液将作为空白。
样本配制加样：本试剂盒检测范围为 3.125-100ng/ml, 将样本用稀释液稀释，复孔加样， 检测 OD 值应该落在标准曲线的中段，如果 OD 值在检测样本的上端或下端，重新稀释样本继续检测。。
5.盖上封板膜，室温避光孵育 1 小时。每孔 150uL 清洗液，清洗检测板 3 次。
6.轻轻涡旋生物素化抗体，制备成 1:1000 的检测抗体。即将 11uL 生物素化抗体加入到11mL 的稀释缓冲液中，充分混合，每孔加入 100uL。
7.盖上封板膜，室温避光孵育 1 小时。每孔 150ul 清洗液，清洗检测板 3 次。
8.轻轻涡旋链霉抗生物素化过氧化物酶，制备成 1:1000 的稀释液。即将 11μL 链霉抗生物素化过氧化物酶加入到 11mL 的稀释缓冲液中，充分混合，每孔加入 100uL。
9.盖上封板膜，室温避光孵育 1 小时。每孔 150uL 清洗液，清洗检测板 3 次。
10.每孔中加入 100µL 底物室温（20℃～25℃）孵育 20min,即向每孔中加入 50μL 终止液（颜色将变为黄色）。
11.轻轻敲击板以确保均匀性，并在 30 分钟内于 450nm 处测量吸光度。
五、检测性能
- 标准曲线：100-3.125ng/mL
- 最低检出限：3ng/mL
- 空白：OD (450nm)<0.08
- 线性相关性：R²＞0.98
六、结果计算
以校准品浓度（ng/ml）为横坐标，校准品 OD 值（检测孔平均 OD 值减去空白孔 OD 值 ）为纵坐标，进行四参数曲线拟合，构建标准曲线。将待检样品复孔的平均 OD 值代入标准曲线，即可精确计算出样本中的 Gal d 4 浓度值。
